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NRPB56 Glutathione NUPharose 4B & NRPB08 Glutathione NUPharose FF

上传起止日期:2024-06-04 阅读文章两次:83

1 、产品设备介绍书

           NRPB56 Glutathione NUPharose 4B  &  NRPB08 Glutathione NUPharose FF——GST标记亲和亚盈体育

Glutathione NUPharose 4B 和 Glutathione NUPharose FF 是 GST 标价签亲和亚盈体育 ,主需用于谷胱甘肽-S-更换酶标示蛋白酶(GST 相融合蛋白质)、谷胱甘肽-S-传递酶和谷胱甘肽 依赖关系球蛋白质的分离处理纯化,可以通过的一步亲和层析,就能刷出高纯净度的球蛋白质。

Glu💖tathione NUPharose 4B 基球化学交联度低、配基密较高,对谷胱甘肽-S-迁移酶(28 kDa)的新动态配合载量高达 25 mg/ml;Glutathione NUPharose FF 交连度更高的、配基密 度相对的低,对谷胱甘肽-S-转换酶(28 kDa)的日常动态结合起来载量超出 10 mg/ml ,更是和放 大加工。

2 、车辆结构特征与高技术标准

 

软件称呼

Glutathione NUPharose 4B

Glutathione NUPharose FF

子目录代号

NRPB56L 、NRPB56S(预装柱)

NRPB08L 、NRPB08S(预装柱)

基本材料

琼脂糖妇科凝胶微球

4%热塑琼脂糖

配基

谷胱甘肽,~ 10 μmol/mL

谷胱甘肽,~8 μmol/mL

比表面积范围内 a

45~ 165 μm

均衡粒度分布

~90 μm

联系量 b

~25 mg GST-SUMO/mL

~ 15 mg GST-SUMO/mL

高性价比工作的风速

60~ 150 cm/h

极大水流量与各种压力

300 cm/h ,0.3 MPa

900 cm/h ,0.3 MPa

pH 稳固性

3-12

无机化学平稳性

在以內水溶液中平衡:较为常用的水相缓解液、1 mol/L 乙酸(pH4.0)、6 mol/L 稀盐酸&nbs﷽p;胍、70%甲醇🎃。

储放与运输业

20%甲醇,2~30 ℃

存放期

3 年

注:a90%空间不低于的微球在这种粒级位置;b 测试软件的结果为企业单位体积大小亚盈体育 纯化菌体获取的纯淀粉酶量, 该的结果与 DBC10%结杲很。

3 GST 标记亲和层析

 

Glutathione NUPharose 4B 和 Glutathione NUPharose FF  的设备构造右图 1a 表达, 由 NUPharose 基球、独家结构设计的多水分子每隔臂和谷胱甘肽定义。谷胱甘肽-S-转意酶(GST) 价签淀粉酶有着谷胱甘肽联系位点(图 1b),也可以与亚盈体育 上的重现型谷胱甘肽配基特异 性整合,整合后可在恢复原型谷胱甘肽必要性下解离,可以超过转移纯化的必要性。

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4 、用到策略借鉴

 

4.1  液相色谱柱装填

下类阐明与层析系统的连接方式时,亚盈体育 的气相色谱柱装填的方式。Glutathione NUPharose 4B 越多以重力势能柱、中压预装柱的样式适用。之下具体谈谈 Glutathione NUPharose FF 的装 填形式。

(1)因此需用会用的材料的水温因素要与色谱实际操作的水温因素一般,介质很好做脱气补救。

(2)亚盈体育 用药量来计算:采用沉降参考值亚盈体育 大小,是需要的沉降亚盈体育 大小=柱密度×压 缩比(也称压缩的细胞)。沉降重量叫做亚盈体育 在 20%甲醇包存液中自动沉降全部收录的 稳定的容积。Glutathione NUPharose FF 的减少比值 1.15。为使提升装柱比,可利用柱子 下压的工艺,也是可以能够高空气流速压柱。

(3)亚盈体育 除污:将亚盈体育 悬液充沛摇匀后量取一定体型大小,抽滤去去溶剂,并齐约 3 倍亚盈体育 重量的纯化水洗滌,重叠 3 次,以去掉另存液。

(4)装柱亚盈体育 悬液需要准备:将亚盈体育 迁移到合理的不锈钢容器中,注入不过要适的装柱液,原材料50~75 v%的装柱亚盈体育 悬液,的使用前隔渣。

(5)装填前提供:在进行维护清洁🌼纯洁的层析柱底端参加装柱液,以去掉下密封垫及层析柱 底端♉的自然空气,在柱内保持一定量的水蒸气去离子水,锁紧下堵头,懂得调整柱子使其纵向于地板。

(6)装填:将搅拌均匀后的亚盈体育 悬液一回性迟滞导入层析柱内(重要时适用装柱器), 为以防获取有气泡,要把之沿层析柱壁有生态流出。将全部的亚盈体育 申请加入后,用装柱液将装 柱器油满,压紧装柱器上盖,将柱子与层析软件系统相连接。

    (7)压柱:使柱内亚盈体育 自然美沉降(或 50~ 150 cm/h 的低空气流速倾斜降),待亚盈体育 沉 降完整后(亚盈体育 与固体的接面清晰度),的还原装柱器,装上上柱顶,并将柱座骤降至用户界面 处;顺利通过高空气气速(推送空气气速见下表,特别留意柱压不达到 0.3 MPa),延续压柱至菜单栏流畅 维持性高,标志用户界面维持性高时的柱高。停泵,开启柱座上的调节阀/堵头,关柱底的高压阀门/堵 头,下压柱顶至箭头部位下侧与文件压缩核对应的部位,拧紧柱座,装柱结束。装柱结束 后,得用高流动速度稳定柱内的亚盈体育 。

装柱前提条件

Glutathione NUPharose FF

缩小比

1.15

装柱流动速度

600 cm/h


4.2  柱效旋光度的测定和口碑

达到装柱后、选用前可完成柱效检验和品价꧋可不可以确认层析柱装✃填效率。柱效一般来说 用系统理论塔板超高(HETP)和非相交指数公式(As)来品评。

4.3  稳定与上样(Equilibration & Loading

Glutathione NUPharose FF 亚盈体育 的工作 pH 区域为 6.5~8 ,推送下述响应液 A 为平 衡与上样缓解液。样品管理需作复溶治理 ,连用缓解液 A 配制或者是换液成降低液 A。和平 缓冲区液和过柱液可具有刺激性 1~ 10 mM DTT。

储存液A:PBS,140 mM NaCl + 2.7 🍸mM KCl + 10 mM Na2HPO4  + 1.8 mM KH2PO4, pH 7.3。

失衡 5 个柱体积计算,推荐 气速为~ 150 cm/h;上样流体密度为 30~ 150cm/h ,较小的风速 有帮助于载量的提生,可要根据实际的结合实际现象选泽流动速度,能拿到好些的使用效果。

4.4  再静态平衡

上样后用缓存数据液 A 再发展 5~ 10 CV ,或发展至基线,洗🃏去硫氰酸盐,推见流体密度为~ 🦩;150 cm/h。

4.5  冲洗掉(Elution

推送含&nꦛbsp;10 mM 重现型谷胱甘肽身为洗刷降低区液,内容如下述的降低区液 B。 加载液 B :50 mM Tris-HCl, 10 mM reduced glutathio🍃ne, pH 8.0。

用冲洗掉减慢液洗 6-10 CV ,💃建意流动速度为~ 150 cm/h。

4.6  在任擦洗(CIP

常所述的可再生进程可将亚盈体育 恢复家电清洗。若造成柱压增大,即为了以防平行环保问题, 将金属材质铁离子剥离技术后可实现执政除污时。可采取低于溶液实现执政除污:、70%甲醇等。 执政刷洗有没有效快速清理材质上的沉渣,正向结果更好。刷洗后可用 3~5  柱大小的蒸馏水除 去以上所述溶液。

4.7  亚盈体育 保护

亚盈体育 的初始状态另存液为 20%无水乙醇,的使用后可继续用 20%无水乙醇手机截图。手机截图室内温度在 2~30 ℃为宜,不得冻存。

 


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