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NRPB44 Biotin NUPharose FF

颁布准确时间:2024-06-04 阅读理解两次:59

1 、设备解释

 

Biotin NUPharose FF 也是种将D-动物素键合在NUPharose 琼脂糖基球上确立的亲 和层析拆分物料。该物料中的生物制品素配基能高炎症因子聊天结合亲和素、链霉亲和素,亲 和力是高,能用的 于亲和素、链霉亲和素基本偶联物的固定化,加固化后的商品可应 应用在鉴别诊断测试,蛋白质纯化等。也可可以直接应用在大削吸引力的亲和素、链霉亲和素基因突变体 的纯化。

2 、软件基本特征与系统指标图

 

好产商品编码称

Biotin NUPharose FF

根目录代号

NRPB44L 、NRPB44S(预装柱)

基本材料

6%交连琼脂糖

配基

D-生物工程素, ≥5 μmol/mL

粒度範圍 a

45~ 165 μm

人均粒度

~90 μm

动态信息融入载量 b

~30 mg 链霉亲和素突变率体/mL 媒介

推薦本职工作流动速度

60~ 150 cm/h

最高流体密度与气压

>900 cm/h ,0.3 MPa

应用 pH

3~ 12(选择的工作中&n💎bsp;pH),3~ 13(CIP 的洗涤)

化工稳定的性

在以下的稀硫酸中稳定的:较常用的水相缓冲器液、0. 1 mol/L NaOH&🔯nbsp;、8 mol/L 车用尿素、 2%吐温 20 等。

存贮与搬运

20%工业乙醇,2~8 ℃(儲存),2~30 ℃(搬家)

保存期期

3 年

注:ღa90%质量分数这的微球此前粒度分布空间;bDBC10%自测條件为:10%流穿,6 min 驻守耗时。

3 、怪物素亚盈体育 亲和的基本原理

 

Biotin NUPharose FF 亚盈体育 是在NUPharose 琼脂糖抑菌凝胶微球骨架子上修饰语D-生物素而 成(图 1a)。D-生物学素与链霉亲和素之间的亲和愈来愈高,其解离常数在 10−14 mol/L 的数量级,是自燃界最厉害的的非共价上下级用途一种。

本產品活性朋友融合链霉亲和素后十分安全稳定,只在严苛的条件下,列如  2%SDS的变形状态能够将链霉亲和素解离。那么 Biotin NUPharose FF 实用做亲和素、链霉亲 和素极其偶联物的稳定住化,稳定住化🏅后的商品可适用于判断判断、血清纯化等。

并且一立这方面,几个链霉亲和素的突然变化体与 D-微生物素中的亲和大幅度降低,随着 基因变异体与 D-生态学素的炎症因子聊天搭配是可逆性的(图 1c),然而也可以用 Biotin NUPharose FF 来纯化链霉亲和素变异体(图2)💃。

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4 、安全使用措施借鉴

 

4.1  气相色谱柱装填

下举例说明与层析软件对接时,亚盈体育 的液相色谱柱装填工艺。

(1)大部分须要使用的涂料的温暖要与色谱控制的温暖一般,药液建议做脱气整理。

(2)亚盈体育 使用计算方式:能够 沉降化学发光法亚盈体育 体型大小,须要的沉降亚盈体育 体型大小=柱体积大小×压 缩比(也称再压缩成分)。沉降体积大概指是亚盈体育 在 20%工业乙醇永久保存液中肯定沉降是加载的 安全体积太。Biotin NUPharose FF 的缩减之比 1.15 。为使达到装柱比,可用柱子下压 的具体方法,也应该根据高风速压柱。

(3)亚盈体育 清洁工作:将亚盈体育 悬液充沛摇匀后量取相关联体型大小,抽除去去固体,并且用约 3 倍亚盈体育 体积大小的纯化水洗衣,连续 3 次,以除掉存放液。

(4)装柱亚盈体育 悬液的准备:将亚盈体育 转让到合适量的贮罐中,引入合适量的装柱液,加工而成 50~75 v%的装柱亚盈体育 悬液,采用前搅拌。

(5)装填前备考:在刷洗彻底的✤层析柱下边申请加入装柱液,以去掉下螺母及层析柱 下边的空气当中,在柱内选择一少部分的水蒸气去离子水,扭紧下堵头,更改柱子使其竖直于地面磁砖。

(6)装填:将搅拌后的亚盈体育 悬液一天性慢慢加进去层析柱内(必需时用到装柱器), 为制止引出有气泡,应让之沿层析柱壁内自然而然滴下。将各个亚盈体育 注入后,用装柱液将装 柱器写满,打紧装柱器上盖,将柱子与层析体系接入。

(7)压柱:使柱内亚盈体育 肯定沉降(或 50~ 150 cm/h 的低流体密度细分降),待亚盈体育 沉 降是完全后(亚盈体育 与液态的对话框明白),弄掉装柱器,装上上柱座,并将柱子减低至网页 处;能够 高气速(最新推荐气速见下表,主意柱压不不低于 0.3 MPa),仍在压柱至表面清新 安全,标示操作界面安全时的柱高。停泵,点开柱顶上的单向阀/堵头,取消柱底的气动阀门/堵 头,下压柱子至标记符号地址以下与文件压缩识别应的地址,卡紧柱子,装柱完毕。装柱完毕 后,必须高水流量平衡点柱内的亚盈体育 。

 

装柱要求

Biotin NUPharose FF

进行压缩比

1.15

装柱风速

600 cm/h

4.2  柱效判断和评判

顺利完成装柱🔜后、实用前可凭借柱效旋光度的测定和好评可能确认层析柱装填服务质量。柱效一般是 用原理塔板高(HETP)和非相对性细胞因子(As)来🅘好评。

4.3  强烈推荐减慢液

强烈推荐用作下储存液运用链霉亲和素或纯化链霉亲和素基因突变体。

组合缓存数据液:20 mM Tris-HCl ,150 mM NaCl ,1 mM EDT🐎A ,pH 8.0

冲洗掉缓解液:结合在一起缓解液 + 10~50 mM D-生物学素 粉碎降低液:0.1 M NaOH

4.4  样板纯化

(1)动态动态平衡:再换结合起来缓存液动态动态平☂衡♕ 5 个柱质量分数,意见与建议水流量为 100~ 150 cm/h。

(2)上样:将工作好的仿品上柱,提案空气流速为 20~ 100cm/h ,可只能根据实际上融入情 况选购空气流速,能赚取好的成果。上柱的样品英文应要量保持与根据缓存液一样。普通可&ജnbsp;用透析、反渗透膜、希释等方式进行处理原辅料。或者上柱前须过 0.45μm 滤膜或高离心分离除掉 不溶物。

(3)再平横:上样后用融合缓冲区液平横 5~ 10 个柱表面积,或不平衡量至基线,洗去&n𝔍bsp;杂质残渣,推介流动速度为 100~ 150 cm/h。

(4)洗刷:用洗刷响应液洗&nbs💮p;6~ 10 个柱体积𒊎大小,意见与建议风速为 100~ 150 cm/h,给出需 要置換缓冲区液。

(5)NaOH 可再生:洗刷需求蛋白酶后的柱子用注射用水家电清洗 3-5 个柱重量,并用 0.1 M NaOH 降解 3-5 个柱容积,再换蒸馏水除污至碱式盐,用 20%酒精上𓂃传柱子,或用配合缓 冲液动平衡后进行下一个纯化,意见空气流速为 100~ 150 cm/h。

4.5  亚盈体育 存有

亚盈体育 的初始状态保持液为 20%酒精,的使用后可继续用 20%工业乙醇存放。存放摄氏度在 2~8 ℃为宜,难以冻存。


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