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NRPB21 & NRPB102——DEAE NUPharose FF&DEAE NUPharose HP

发布公告日期时间:2018-10-27 阅读书三次:8925

1 、产品设备价绍

          NRPB21 & NRPB102——DEAE NUPharose FF和DEAE NUPharose HP弱阴化合物传递亚盈体育

DEAE NUPharose 类别是弱阴离子交換亚盈体育 ,DEAE 为二乙氨基乙基,NUPharose 为纽龙动物金典的琼脂糖凝胶的作用层析物质基球。与强阴亚铁离子交互(Q)亚盈体育 比较,弱阴离 子更换亚盈体育 都有着不同于的采用性,当 Q 亚盈体育 就没有办法要求抉择性时可注重采用DEAE 亚盈体育 。

可根据辩认率和可用于地方有差异,DEAE NUPharose  类别可可分成 DEAE NUPharose FF (~90 μm)和 DEAE NUPharose HP(~35 μm)新老款。F📖F 为 🥃;Fast Flow 的缩略词,DEAE NUPharose FF 配备快流动速度的特性,可以于迅猛纯化血清质,符合性广,易增加。HP 为 High Performance 的缩略语,DEAENUPharose HP 必备条件区分率高的特征 ,大多数用于精纯阶 段。

2 、厂品共同点与高技术因素

 

物料品牌

DEAE NUPharose FF

DEAE NUPharose HP

总目录代码

NRPB21L、

NRPB21S(预装柱)

NRPB102L、

NRPB102S(预装柱)

产品

6%交连琼脂糖

基本功能基团

二乙氨基乙基,-CH2CH2NH(CH2CH3)2+

比表面积使用范围 a

45~165 μm

20~50 μm

均衡粒级

~90 μm

~35 μm

化合物相互交换电容量

80~120 μmol OH-/mL

40~80 μmol OH-/mL

动态图片融合载量 b

≥50 mg/mL

≥40 mg/mL

安利工作的水流量

150~300 cm/h

60~150 cm/h

较大 气速 c

1200 cm/h

300 cm/h

化学式不稳判定性

在下述氢氧化钠溶液中稳定的:经常用到的水相缓冲区液,1 🌠M 氢阳极氧化钠,8 M 车用尿素,6 M 酸洗 胍,70%乙酸乙酯。

pH 稳确定性

3~9(比较适合的工做 pH),3~12(短期动态平衡);2~14(暂时性相对稳定)

保存与搬运

20%无水乙醇,2~30 ℃

质保期

5 年

注:a90%比热容这些的微球在这儿颗粒直径超范围;bDBC1🃏0%测试软件先决条件为:10%ಌ流穿,牛血贞洁 蛋白质,2 min 等待准确时间;c 10 cm 柱高低的最明显试验流动速度。

3 、阴正离子对调亚盈体育 事情目的

 

阴阳正离子对调层析是通电的荷的学习目标大分子与阴阳正离子对调层析介质通过化合物互相交换的区分纯化 历程,主要的依懒感应起电粒子相互之间的功效,根据感应起电碳原子的差别的对其进行离心分离。因一切生态学碳原子都要极 性的,在务必环境下均可通电的荷,以蛋白质为例,当水溶液 pH 低过球蛋白的等电点(PI) 时,球蛋白质含量团伙式带负电势,则可能与阴化合物相互交換亚盈体育 实现化合物相互交換而融入。不相同团伙式的 有电量有差异 ,与层析物料的根据耐用的情况有差异 ,经由改善洗刷水平会将有差异 团伙依次 冲洗掉之后,最终得以超过破乳纯化的原因。

图 1 是典范的阴亚铁化合物交易层析的时候示图图,阴亚铁化合物交易层析是说 层析媒介还可以与溶 液中的阴阳亚铁离子做出阳亚铁离子传递。DEAE 基团的电离度小,是弱含碱正离子相互交换剂,以求本产 品被通常是指弱阴离子对调亚盈体育 。当亚盈体育 占据均衡方式时, DEAE 阴阳离子身边是带负电荷量的 对阳离子,一般 是 Cl- 。在与计划原子核实行阴离子更换而融合的过程中中,带负电的分子式被结 合,不感应起电还有带正电的原子核未被融入,实现了大概剥离的功能。阴阴阳离子互相交换层析可 能够提升的流动相的铁离子难度又或者拉低 pH 的途径将最终目标大分子洗刷。的提升流动性相的阴阳离子强 度是价格竞争冲洗掉的阶段(图 1a),分子运动相的化合物效果加强后,负电荷量与要求分子式竞争性为 DEAE 基团的对铝离子,要根据自由电荷的几个和相结合的经久耐用阶段,有所不同的原子被前后冲洗掉接下来, 为了提升纯化的的效果。另一个一立面,对方分子式必带的自由电荷与生活环境的 pH 有关系,变低 pH&nbs▨p;后,带负电的学习目标碳原子所需电荷量数目抑制(图 1b),与媒介相结合的不变,避免后期使用时出现晃动影响体验效果方面变低,对此 减低 pH 也是阴亚铁离子交互💞层析的一些过柱方法。

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4 、适用形式参考资料

 

4.1  离子交换柱装填

以下的简述与层析系统化拼接时,亚盈体育 的离子交换柱装填形式。

(1)任何是需要使用到的原料的温湿度要与色谱作业的温湿度同样,透明液体最棒做脱气加工处理。

(2)亚盈体育 需水量计算方式:可以通过沉降按量亚盈体育 密度,须得的沉降亚盈体育 体积=柱量×挤压 比(也称文件压缩细胞)。沉降密度叫做亚盈体育 在 20%甲醇手机截图液中清新沉降仍然读取硬盘的不稳 球体积。DEAE NUPharose FF 的缩减比是~1.15 ,DEAE NUPharose HP 的解压缩比值~1.20。 为以达到缩短比,可顺利能够柱座下压的措施,也应该顺利能够高水流量压柱。

(3)亚盈体育 进行维护清洁:将亚盈体育 悬液做好摇匀后量取相对应的体积计算,抽去液,并且用约 3 倍填 料容积的纯化水洗涤剂𓆏,多个 3 次,以去掉存为液。

(4)装柱亚盈体育 悬液做准备:将亚盈体育 变更到合适的容器类中,加进适量的的装柱液,作成 50~75 v%的装柱亚盈体育 悬液(原包装盒中亚盈体育 重量结果为67%),运行前隔渣。

(5)装填前开始准备𒊎:在洗彻底的层析柱上方加如装柱液,以出掉ꦐ下螺母及层析柱下 下空气中,在柱内继承一少部分的水蒸气去离子水,卡紧下堵头,校准柱子使其斜面于房屋地面。

(6)装填:将搅拌后的亚盈体育 悬液第1次性慢慢放进层析柱内(一定要时利用装柱器), 为以防获取导致气泡,应该让之沿层析柱内壁上那自然流淌。将所有亚盈体育 参与后, 用装柱液将装柱 器加完,紧固装柱器上盖,将柱子与层析设计衔接。

(7)压柱:使柱内亚盈体育 自然的沉降(或 50~150 cm/h 的低流动速度倾斜降),待亚盈体育 沉降 是后(亚盈体育 与固体的画面看不清楚),除去装柱器,装上上柱顶,并将柱顶下滑至程序界面处; 顺利通过高风速(最新推荐风速见下表,注意力柱压不低于 0.3 MPa),再继续压柱至软件界面比较清楚可靠, 记号菜单栏保持稳定时的柱高。停泵, 访问柱顶上的的阀门/堵头,关机柱底的高压阀门/堵头,下压柱 头至标记符号方位正上方与压缩视频核查应的方位,扭紧柱顶,装柱完工。装柱完工后, 可用高流 速动平衡柱内的亚盈体育 。

 

装柱前提条件

DEAE NUPharose FF

DEAE NUPharose HP

压缩成比

~1.15

~1.20

装柱流体密度

~600 cm/h

~150 cm/h

4.2  柱效检测和点评

达成装柱后,操作前可按照柱效旋光度的测定和判断能明确层析柱装填效果。柱效一般而言用 说法塔板层面𒉰(HETP)和非等势面分子(As)来好评。

4.3  平横与上样(Equilibration & Loading

用到阴亚铁离子变换亚盈体育 时,通常用的降低液有 Tris-HCl、乙酸乙酯胺、组氨酸等缓冲器风险管理体系, 溶度为~20 mM 为宜。只含别盐的据𒀰此响应液分为动态平衡响应液,记为响应液 A。储存 液 A 的优点为低盐,pH 不少于远远超出制定目标血清等电点另一个企事业单位。

在上样前,必须缓冲区液 A 在操作流程流动速度下平衡量层析柱,该方式通畅要求 5~10 个柱体 积的缓存数据液 A,以电导、pH 等监测走势技术参数未变且与保护液 A 相应为界。

阴离子对换亚盈体育 中最应用的纯化方法为“联系模型(binding)”,即个人目标蛋清与亚盈体育 进 行铁离子变换后结合在一起,硫氰酸盐则流穿。在非常施工地点,也会实用“流穿经济模式(flowthrough)”, 即沉淀物与亚盈体育 结合在一起,个人目标蛋白质流穿,该摸式太多使用重度又或者精纯时期。

样品英文常混溶据此缓冲器液 A,和将试样饱和溶液使用换液治疗,换置成缓冲液 A 体 系。上样量可按“mg  的目标蛋白质/mL 亚盈体育 ”来因素,一般为 DBC10% 的 50~80%,比如 DEAE NUPharose FF 类产品对 BSA 的 DBC10%为~50 mg/mL,纯化 BSA 时的上样量多为🍬 25~40 mg/mL。不但 DBC10%,也能测式上样流穿液中的的目标蛋白质选定上样量。

4.4  消毒(Wash

用 3~10 个柱体积计算的均衡液 A 冲𝕴泡上样后的层析柱,洞察分析检测工具器的的变化,是直到🙈电导、 pH 等技术参数没变,因此未对调的成分被进行维护清洁回去。

4.5  冲洗掉(Elution

最喜欢用的洗刷途径为增强洗刷液中 NaCl 的质量浓度(在缓存液 A 里添加入🌟 NaCl),分享 在ꩵ 0~500 mM 超范围内参与阶跃过柱并且线型系数过柱。对一定的场合,也能够转变 pH 也可以一并变化阴离子刚度和 pH 来冲洗掉,确认推广冲洗掉因素都可以上升层析的使用效果。

4.6  二次利用(Regeneration

都可以挺高铝离子抗压强度的 NaCl 液体(1~2 M NaCl)将联系结实、未被冲洗掉的蛋白质冲洗掉, 对亚盈体育 确定机体回收利用,本产品设备在机体回收利用后利于用2次。也就能够优化 pH 还同一改动亚铁离子标准 和 pH 采取二次利用。二次利用后要有用缓冲区液 A 失衡。

4.6  执政家电清洗(CIP

若有核球蛋白酶沉积、脂核球蛋白酶或疏水核球蛋白酶与亚盈体育 融合不可在上述内容时候中冲洗掉, 则需要在位清&n💎bsp;洗除开。可选取有以下使用来当权洁净:1 M NaOH、70%甲醇、30%异丙醇等。需备~2.5 CV 的盐溶液参与当政的清洗,沾染日子~30 min。在为难以清理后需求用缓冲区液 A 动平衡。

4.7  亚盈体育 留存

亚盈体育 的默认值存储液为 20%酒精,施用前一天可再用20%乙酸乙酯存为。存为工作温度在 2~30℃ 为宜,不可以冻存。


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